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雞?。―EV)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用

2016-04-26 [1177]

雞病(DEV)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.  編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照  2孔、陽性對照  2孔、空白對照   1
孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.  加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照    50µl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液  40µl,然后再加待測樣品  10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不
觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.  溫育:用封板膜封板后置  37℃溫育30分鐘。
4.  配液:將  30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置  30秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑  50µl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止:每孔加終止液    50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):
計(jì)算和結(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品 OD值<臨界值(CUT    OFF)者為傳染性法氏囊病毒抗體(IBDV-Ab)
陰性
陽性判定:樣品 OD值≥臨界值(CUT    OFF)者為傳染性法氏囊病毒抗體(IBDV-Ab)
陽性
注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時(shí),參考波長為  630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸,使用時(shí)必須
注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月

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