豬脂多糖 (LPS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
豬脂多糖 (LPS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬脂多糖 (LPS)。用純化的豬脂多糖 (LPS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入脂多糖 (LPS),再與 HRP標記的脂多糖 (LPS)抗體 ,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的脂多糖 (LPS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬脂多糖 (LPS)濃度。
試劑盒組成
30倍濃
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
1份
2 酶標試劑
標準品(480μg/L)
標準品稀釋液
3 酶標包被板
4 樣品稀釋液
5 顯色劑 A液
6 顯色劑 B液
10 說明書
11 封板膜
12 密封袋
2張
1個
標本要豬脂多糖 (LPS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
240μg/L
120μg/L
60μg/L
30μg/L
15μg/L
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150μl的原倍標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 5號標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 4號標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 3號標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 2號標準品加入 150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后
37℃溫育30分鐘。
30倍稀釋后備用
配液:將 30倍濃
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜重復 5次,拍干。30秒后棄去,如此
加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。
操作程序總:
計算以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項豬脂多糖 (LPS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有析出,稀釋時可在浴中加溫助溶,洗滌時不影響。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月