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豬A型口蹄疫抗體(FMDV-AAb)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

2015-11-16 [853]

豬A型口蹄疫抗體(FMDV-AAb)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。
96T
使用目的:
本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 A型口蹄疫抗體(FMDV-A  Ab)表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中豬 A型口蹄疫抗體(FMDV-A  Ab)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中 A型口蹄疫抗體(FMDV-A  Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與  HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TB顯色。TB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),與    CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中豬 A型口蹄疫抗體(FMDV-AAb)的存在與否。
試劑盒組成
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1份
2   酶標(biāo)試劑
陽性對(duì)照
陰性對(duì)照
3   酶標(biāo)包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個(gè)
標(biāo)本要求豬A型口蹄疫抗體(FMDV-AAb)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.  編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照  2孔、陽性對(duì)照  2孔、空白對(duì)照   1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.  加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照    50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液  40μl,然后再加待測樣品  10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.  溫育:用封板膜封板后置  37℃溫育30分鐘。
4.  配液:將  30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置  30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑  50μl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):豬A型口蹄疫抗體(FMDV-AAb)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
計(jì)算和結(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均值≥1.00;陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品 OD值<臨界值(CUT    OFF)者為 A型口蹄疫抗體(FMDV-A  Ab)陰性
陽性判定:樣品 OD值≥臨界值(CUT    OFF)者為 A型口蹄疫抗體(FMDV-A  Ab)陽性。
注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時(shí),參考波長為  630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月

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