ELISA試劑盒五大檢測方法
zui近,站上關于ELISA試劑盒的討論帖子非常多,今天也發(fā)表一下自己的一些看法,對ELISA的見解有不對的地方,希望指正或者直接拍磚。
首先,談一下市場。首先RnD和Bender等一些的ELISA試劑盒還是很值得信賴的,也得到了市場的認可,特別是RnD的盒子,我們賣的很好,就是價格好貴,經(jīng)費不是很充裕的實驗室難消費的起。國內(nèi)的廠家,質(zhì)量在靈敏度上和RnD的盒子還是有很大差距,但是有一點是可以肯定的,盒子反映的結果是公正客觀的。還有一個缺點就是廠家可供選擇的盒子種類比較少,主要集中在炎癥細胞因子上。
第二,談一下如何靈活應用ELISA這個檢測方法以及如何去挑選ELISA試劑盒。ELISA這個方法的原理,大家都很清楚,網(wǎng)上的資料一大堆??烧嬲闷饋淼臅r候,有時候就有點犯糊涂,我談一下自己的理解。
1、有些客戶會用OVA(卵清蛋白)做一些哮喘,過敏性腸炎的模型,后來會檢測粘膜特異性的sIgA以及血清里面IgG,IgE等指標。當客戶向我咨詢購買這幾個指標的盒子的時候,我很肯定地說這些指標的檢測要你自己特制,不會有商品化的盒子出售的。
2、對于一些小分子的檢測,比如前列腺素、糖皮質(zhì)激素的檢測,我的理解是要用競爭法ELISA去檢測,也要購買采用這個方法的盒子。一般細胞因子的檢測,都是采用常規(guī)的夾心法ELISA檢測,因為因子分子量比較大,一般10幾個KD左右,很容易找到兩個或者多個抗原表位。而小分子很難找到兩個不同的表位,也就決定了包被抗體和檢測抗體無法同時結合小分子并固相化。解決方案就是酶標板上包被二抗,每個孔加入一定量的酶標的小分子,然后加樣品,再加不帶標記的檢測抗體,顯色底物。樣品的目的小分子的含量越高,吸光度越低。
3、對于胰島素的檢測,我還是推薦millpore 旗下LInco公司的檢測試劑盒,不管是放免還是ELISA,據(jù)說權在他們手中。
4、做實驗面向的ELISA試劑盒種屬主要是人,大鼠和小鼠,現(xiàn)在市面上雞、牛、馬、羊、兔各種指標的盒子都有售,真不知道這些抗體是怎么來的,。據(jù)我所了解,這些炎癥指標還是有很大種屬特異性的。
5、好多客戶有個誤區(qū),拿來一個指標就想當然地嘗試用ELISA去檢測,其實應該多動腦,該檢測活性的檢測活性,該做western的做western。ELISA試劑盒檢測方法簡單,靈敏度高,