酶聯(lián)免疫試劑盒是一種很敏感的測(cè)定方法
酶聯(lián)免疫試劑盒抗原抗體反應(yīng)后直接測(cè)定形成的沉淀或濁度,敏感度可達(dá) 5~10μg/ml,但在臨床檢驗(yàn)中,某些待測(cè)物在標(biāo)本中的含量遠(yuǎn)低于這一水平,因此要尋找增加敏感度的方法。標(biāo)記的免疫測(cè)定是 將檢測(cè)試劑中的抗原或抗體用可微量測(cè)定的物質(zhì)加以標(biāo)記,通過測(cè)定標(biāo)記物來提高敏感度。在放射免疫測(cè)定和酶免疫測(cè)定中,標(biāo)記物分別 為放射性核素和酶,zui后用測(cè)定放射性和酶活力來計(jì)算待檢物的量,敏感度可比直接測(cè)定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標(biāo)記免疫測(cè)定中, 一般加入過量的標(biāo)記試劑以保證與待測(cè)物*反應(yīng)。以標(biāo)記抗體(Ab ※)檢測(cè)抗原(Ag)為例,反應(yīng)式如下: Ag+ Ab※→ AgAb>※+ Ab※
酶聯(lián)免疫試劑盒在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※ ,如不將兩者分離而測(cè)定標(biāo)記物,測(cè)得的結(jié)果將為兩者之和。因此,游離標(biāo)記物與結(jié)合標(biāo)記物的分離是標(biāo)記免疫測(cè)定中的重要步驟??刹?用多種手段,固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上,白介素ELISA試劑盒然后再與標(biāo)記的抗原或抗體直接反應(yīng),結(jié)合的標(biāo)記物被固定在載 體上,而游離的標(biāo)記物留于溶液中。這樣可以通過洗滌將游離的Ab ※除去,結(jié)合標(biāo)記物的測(cè)定可在固相上進(jìn)行。