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分析影響ELISA試劑盒非特異性顯色

2013-11-29 [690]

聚苯乙烯ELISA試劑盒板因?yàn)樵系牟煌椭谱鞴に嚨牟顒e,各產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。溶血標(biāo)本,紅細(xì)胞溶解破裂,開釋出血紅素形成,而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物,以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中,溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。因此,在選擇ELISA試劑盒同時(shí)要對其使用的微孔板型號進(jìn)行認(rèn)證,評估。試劑盒特異性因素固相載體的選擇,ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為常見。外源性干擾物,經(jīng)常因樣品采集、貯存、處理不當(dāng)造成如樣品溶血,被細(xì)菌污染,標(biāo)本凝集不全等。如在冰箱中保留過久,其中的IgG可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。但因?yàn)槭芊椒▽W(xué)及技術(shù)前提的限制,在酶聯(lián)吸附測定中有時(shí)不可避免的會泛起一定的非特異性,但我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至zui低限底,從而進(jìn)步檢測的特異性,并得到更正確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)自1971年自問世以來,以其敏感性高,特異性強(qiáng),操縱簡便、安全,而廣泛應(yīng)用于臨床診斷,開創(chuàng)了免疫學(xué)診斷的新紀(jì)元。

    綜上所述,因?yàn)槊嘎?lián)免疫吸附技術(shù)目前在技術(shù)上缺乏尺度化,盡管目前上以及我國有了部門尺度血清或參比血清(血清盤)。因此,血標(biāo)本在采集處理時(shí)應(yīng)小心,在冰箱中保留不易過久。在酶聯(lián)免疫測定尤其是間接ELISA中,試劑的特異性取決于使用抗原的純度。標(biāo)本凝集不全時(shí),血清中會殘留部門纖維蛋白原,也易造成假陽性。檢修標(biāo)本中含有酶標(biāo)記物的干擾物,內(nèi)源性干擾物類風(fēng)濕因子(RF)、黃疸等,類風(fēng)濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的自身抗體,多數(shù)為IgM類,能充當(dāng)抗原成分與固相及酶標(biāo)抗體反應(yīng),從而呈現(xiàn)非特異性顯色。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP(辣根過氧化酶),有海內(nèi)報(bào)道酶免HBsAg試劑檢測溶血標(biāo)本時(shí)可造成假陽性。影響ELISA中非特異性顯色的原因良多,如ELISA試劑盒特異性、檢修標(biāo)本中含酶標(biāo)記物的干擾物,操縱過程中的題目。黃疸血標(biāo)本中常含有內(nèi)源性過氧化物酶,如用辣根過氧化物酶為標(biāo)記物,就有可能產(chǎn)生非特異性顯色。
目前因?yàn)榧夹g(shù)前提的限制,包被用抗原或抗體的純度不可能達(dá)到100%,所以有些非特異性顯色不可避免,只能盡可能進(jìn)步純度,進(jìn)步特異性。它具有良好的吸附機(jī)能,孔底透明度高,空缺值低,各板之間、統(tǒng)一板各孔之間機(jī)能相近。但同其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、出產(chǎn)及使用中經(jīng)常會遇到非特異性題目,本文就在實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的一些原因及如何采取一些措施,消除非特異性顯色作一分析。本文就這一原因作一扼要分析,以便可以通過以上措施把非特異顯色降至zui低限度,從而進(jìn)步檢測的特異性,并得到更正確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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