1.elisa試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書要求保存。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭 ，避免交叉污染。
2．加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔之見的時(shí)間間隔過大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性；一般加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器 。
3.孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育，嚴(yán)格按照說(shuō)明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
4.洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙 上充分拍干，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響zui后的酶標(biāo)儀 讀數(shù)。
5.反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，10分鐘左右），如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。|
6.建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。|7.建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問，可和所購(gòu)經(jīng)銷商，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
操作步驟
1. 取出elisa試劑盒，于室溫（20-25℃）放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)在室溫（20-25℃）內(nèi)進(jìn)行。
2. 取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對(duì)照加入50μl的蒸餾 水；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素；（不含空白對(duì)照孔,切忌：生物素只加樣品孔?。?br />5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液；（不含空白對(duì)照孔）
6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng) 1小時(shí)；（在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度）
7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次，保持各孔有充足的水壓；（濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋）
8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；（不含空白對(duì)照孔）
10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘；
11. 各孔加入50μl終止液，終止反應(yīng)；
結(jié)果判斷
1. 30分鐘內(nèi)在波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值；
2. 以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線圖；
3. 根據(jù)樣品的OD值查找對(duì)應(yīng)的濃度范圍；
4. 敏感度：0.1 ng/ml