人谷氨酸脫羧酶（GAD）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。
 

人谷氨酸脫羧酶（GAD）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

使用目的：
　　本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中谷氨酸脫羧酶（GAD）表達。
 

人谷氨酸脫羧酶（GAD）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人谷氨酸脫羧酶（GAD）表達。用純化的人谷氨酸脫羧酶（GAD）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中谷氨酸脫羧酶（GAD）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的谷氨酸脫羧酶（GAD）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人谷氨酸脫羧酶（GAD）的存在與否。
　　　試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 陽性對照 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 陰性對照 0.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

計算和結(jié)果判定：
　  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
　  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
　  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為谷氨酸脫羧酶（GAD）陰性
　  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為谷氨酸脫羧酶（GAD）陽性
　。
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
ND0056-0.5ml NTP Mixture （10mM） 10mM溶液 （ATP, CTP, GTP & UTP） / 0.5ml
NE891-100ml Nuclease Eliminator Solution 去核酸酶試劑（液體） / 100ml
NE891-500ml Nuclease Eliminator Solution 去核酸酶試劑（液體） / 500ml
NLS004797-15KU Nuclease S7, from Staphylococcus aureus 核酸酶 S7 / 15KU
NB0390-5g Nystatin 制霉菌素 [1400-61-9] 5g
NB0390-25g Nystatin 制霉菌素 [1400-61-9] 25g
N0418-5MU Nystatin 制霉菌素 [1400-61-9] 5MU
N0418-25MU Nystatin 制霉菌素 [1400-61-9] 25MU
BS728-10ml Nystatin solution （5mg/ml） 制霉菌素溶液 / 10ml
O1465-25g n-Octadecane 正十八烷 [593-45-3] 25g
O1466-250g 1-Octadecanol 硬脂醇 [112-92-5] 250g