小鼠ELISA試劑盒技術(shù)說明
小鼠ELISA試劑盒的整體概念。接著分別從原理、特點和使用方法三個方面進行說明。在原理部分,簡述了抗原 - 抗體特異性結(jié)合反應(yīng)的過程。特點方面突出了高靈敏度、特異性強、操作簡便和穩(wěn)定性好等優(yōu)勢。使用方法則按照一般的實驗流程,從樣本處理到最終測定進行了較為詳細的描述。
采用抗原 - 抗體特異性結(jié)合反應(yīng)。將已知的抗原或抗體固定在固相載體表面,加入待檢測的小鼠ELISA試劑盒樣本,樣本中的目標分子與固相載體上的抗原或抗體結(jié)合,再加入酶標記的二抗,通過酶催化底物產(chǎn)生顯色反應(yīng),根據(jù)顏色的深淺來確定目標分子的含量。
一、操作步驟:
1.使用前,將所有小鼠ELISA試劑盒充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,小鼠ELISA試劑盒輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9.在450nm波長處測定各孔的OD值。 需要而未提供的小鼠ELISA試劑盒和器材。
二、特點:
高靈敏度:能夠檢測到微量的目標分子。
特異性強:對特定的目標分子具有高度的選擇性。
操作簡便:無需復(fù)雜的儀器設(shè)備,實驗步驟相對簡單。
穩(wěn)定性好:小鼠ELISA試劑盒在一定的儲存條件下能夠保持較長時間的穩(wěn)定性。
三、使用方法:
樣本處理:根據(jù)不同的目標分子,對小鼠ELISA試劑盒樣本進行適當(dāng)?shù)奶幚怼?/p>
加樣:將標準品和處理后的樣本加入到小鼠ELISA試劑盒的微孔板中。
孵育:在特定的溫度和時間下進行孵育,使抗原 - 抗體充分結(jié)合。
洗滌:去除未結(jié)合的物質(zhì)。
加酶標二抗:加入酶標記的二抗。
再次孵育和洗滌。
顯色:加入底物,產(chǎn)生顯色反應(yīng)。
測定:使用酶標儀測定吸光度值,計算目標分子的含量。
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