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96T小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒江西,宜春

2012-05-11 [1389]

 小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒江西,宜春

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清或血漿

 小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒江西,宜春

試驗(yàn)原理:

sIgA試劑盒是間接法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知sIgA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將sIgA和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中sIgA的濃度呈比例關(guān)系。

 小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒江西,宜春

試劑盒內(nèi)容及其配制

試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制

96/48人份酶標(biāo)板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型

塑料膜板蓋1塊半塊即用型

標(biāo)準(zhǔn)品:40umol/L1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀

空白對(duì)照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型

生物素標(biāo)記的抗sIgA抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型

親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型

洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

 

自備材料

1.蒸餾水。

2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3.振蕩器及磁力攪拌器等。

 

安全性

1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。

2.實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

 

操作注意事項(xiàng)

1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。

2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。

5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6.洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7.底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8.加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

9.按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

 

樣品收集、處理及保存方法

1、血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

試劑的準(zhǔn)備

1.標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:

40 umol/L(6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。

20 umol/L(5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10 umol/L(4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5.0 umol/L(3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.5 umol/L(2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.25 umol/L(1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

0 umol/L(空白對(duì)照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

 

2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

 

操作步驟

1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。

2.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。

4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

8.取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。

9.在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

 

建議使用的實(shí)驗(yàn)方案

標(biāo)準(zhǔn)品濃度(umol/L)

A4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

B2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

C1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

D5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

E2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

F1.251.25樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

 

 

局限

6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果。

 

試劑盒性能

1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

 

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的sIgA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的sIgA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

 

3、檢測(cè)值范圍:0-40umol/L

 

4、敏感度: 0.1 umol/L

E2895-250gEthyl gallate 沒(méi)食子酸乙酯[831-61-8]
F2025-5gEvans blue 埃文斯藍(lán)[314-13-6]
B2850-25g5-Bromouracil 5-溴尿嘧啶[51-20-7]
BB0246-1g5-Bromouridine 5-溴尿苷[957-75-5]
B6763-100g2-Bromovaleric acid 2-溴戊酸[584-93-0]
B6516-100gBuflomedil hydrochloride 鹽酸丁咯地爾[35543-24-9]
B4034-500ml1,4-Butanediol 1,4-丁二醇[110-63-4]
BD1237-5g1-Butanesulfonic acid, sodium salt 1-丁烷磺酸鈉[2386-54-1]
B1800-500mln-Butanol 正丁醇[71-36-3]
B2101-250ml2-Butanol 2-丁醇[78-92-2]
B2061-250mltert-Butanol 叔丁醇[75-65-0]
B1701-25gtrans-2-Butenoic acid 巴豆酸[107-93-7]
B1900-250ml2-Butoxyethanol 乙二醇單丁醚[111-76-2]
B2670-500mlButyl stearate 硬脂酸丁酯[123-95-5]
CA0217-1g (10ml)C10 E6 10%溶液[5168-89-8]
 

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