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正常人外周血白細胞的分離-加速紅細胞沉降法

2012-01-13 [2580]

 利用高分子量的聚合物促使紅細胞凝聚成串錢狀,從而加速紅細胞沉降,使之與白細胞分離。常用的高分子聚合物有明膠、右旋糖酐及甲基纖維素等。

正常人外周血白細胞的分離-加速紅細胞沉降法

 

1 、試劑及配制
1)3%明膠(粘度為25泊以上):選取明膠,用生理鹽水配成3%溶液,置沸水浴加熱溶解,分裝,高壓蒸汽滅菌8磅15~20min。
2)6%右旋糖酐(分子量200~400KD):用生理鹽水配制。

2 、操作方法
1)取抗凝靜脈血加入等量3%明膠鹽水或6%右旋糖酐溶液中,混勻。
2)將試管直立靜置室溫或37℃溫箱中30~60min,利用明膠與紅細胞的粘合作用,促使紅細胞快速下沉,而白細胞留在明膠溶液中。
3)用毛細吸管吸取富含白細胞的上層液,移入另一試管中。
4)加入無Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液至離試管口3cm處,混勻,以水平離心機2000r/min 離心10min,棄上清,同法在洗滌兩次。
5)沉淀細胞用適量10%~20% 滅活小牛血清的Hank’s液重懸,計數,配成所需的細胞濃度的懸液,一般常用2×106 /min。

正常人外周血白細胞的分離-加速紅細胞沉降法

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