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如何生成更可靠的免疫ELISA表型數(shù)據(jù)

2021-08-05 [1721]


ELISA數(shù)據(jù)中雖然 表面 CD分子仍是用于免疫表型的常用的標記 ,但常規(guī)平行檢測 的CD分子卻有所增加。研究者把其它細胞表面 的蛋白和細胞內(nèi)標記 物加入到免疫表型分析 中,已經(jīng)成為標準做法 。因為這些進展不可避免地使得 研究設(shè)計更加具有挑戰(zhàn)性,我們咨詢了一組專家來幫助您生成更可靠的免疫表型數(shù)據(jù) 。


研究免疫表型 時,其復雜性是不同 的。


從基礎(chǔ)研究到臨床監(jiān)測 ,研究者 對這些 細胞 進行 免疫 表型 分析 ,有很多原因 。 Sartorius細胞 分析測試 開發(fā) 經(jīng)理 MarkCarter指出 ,免疫表型研究的范圍 從識別單一表型到復雜的多參數(shù)應用 ,比如 識別 從HIV 患者的血液樣本中提取 CD4+T細胞 。 他說 :“在試劑 、儀器 和軟件 方面 的進步 使得 免疫 表型 研究 更為 復雜 。" 例如 ,現(xiàn)在可以對分化 細胞進行質(zhì)量控制 ;描述 癌癥 及其 治療 反應 ;研究 疾病 對病人 免疫系統(tǒng) 的影響 ;或者 為器官捐贈的捐獻者 和接受者進行 免疫 配對 。


用到 的標記 的數(shù)量和類型決定了免疫 表型 的目的 。 CellSignalingTechnology高級 開發(fā) 科學家 SarahKlein博士指出 :“流式細胞術(shù)免疫 表型分析的閱讀次數(shù)少為兩次 ,因為你 總是 想將細胞 活性 的標記 與你選擇 的標記結(jié)合起來 .“有些 實驗室在有特殊問題 要問時會 做3-5個標記 免疫表型分析 ,而另一些 實驗室 通常 在多個 平臺 上使用 10 -15 個標簽組合 。 大數(shù)量的標記只是生物信息學 平臺 的局限性 ,包括檢測技術(shù) 、可獲得 的抗體 和分析 大型 面板 提供 的大量數(shù)據(jù) 。


Bio -Rad流式細胞 學現(xiàn)場 營銷專家 MikeBlundell對此 表示 贊同 ,并指出 ,盡管可以單獨使用一種標記 來識別特定類型 的細胞 (如T細胞 CD3或B細胞 CD19),但是 確定 血液 中的一個普通譜系可能需要四個標記 ,并確定特定的譜系組合 ,就可以把這一 數(shù)字 增加 到八個 。 他說:“監(jiān)控 激活狀態(tài) 、記憶 狀態(tài) 和多個 子集 的譜系 通常 需要 超過20個標記 。 比如,即使 只看T細胞亞群,你通常也想要確定樣品中其他類型的細胞 ,以確保他們不會受到影響 ,或者從你的分析中去除這些細胞 。


在面板中可以包含的標簽 越多,需要用到的樣本 就越少 ,"MichelleM.Poulin博士解釋道。Fluidigm質(zhì)譜流式細胞術(shù)領(lǐng)域應用的高級經(jīng)理。研究者們用質(zhì)譜流式細胞學技術(shù)來進行免疫表型分析,通常會將超過30到40個標記結(jié)合在一起 。

ELISA試劑盒.jpg


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