處理ELISA試劑盒有哪些要求和方法
需要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將羊ELISA試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都康復(fù)到室溫,以使成果更安穩(wěn)。實(shí)驗(yàn)時(shí),要使底物避光保存,用槍汲取液體時(shí)速度不能太快,避免發(fā)生氣泡而使汲取量不準(zhǔn)確,汲取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,削減差錯(cuò),要確保移液槍的準(zhǔn)確性,差錯(cuò)不能超過(guò)百分之2。
1.血清:室溫血液天然凝結(jié)10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)搜集上清,保存過(guò)程中如呈現(xiàn)沉積,應(yīng)再次離心。
2.血漿:應(yīng)根據(jù)羊ELISA試劑盒的標(biāo)本的要求挑選EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),保存過(guò)程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)該再次離心。
3.尿液:用無(wú)菌管搜集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)搜集上清,保存過(guò)程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)排泄性的成份時(shí),用無(wú)菌管搜集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)搜集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。經(jīng)過(guò)重復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)搜集上清。保存過(guò)程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取分量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮敏捷冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS,用手藝或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)搜集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提?。?/strong>提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立刻進(jìn)行實(shí)驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免重復(fù)凍融.