ELISA試劑盒分類操作過程
1. ELISA試劑盒白介素類可于白色布景上,直接用肉眼查詢效果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
2. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,參與新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗刷。
3. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中參與臨時制作的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
4. 停止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。
5. 效果判定:可于白色布景上,直接用肉眼查詢效果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:ELISA試劑盒白介素類檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。1.ELISA試劑盒白介素類用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過液。次日洗刷3次。
6. 加一定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗刷。(一同做空白、陰性及陽性孔對照)
7. 于反應(yīng)孔中,參與新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗刷,zui后一遍用DDW洗刷。
8. 于各反應(yīng)孔中參與臨時制作的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘
9. 于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml
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