ELISA試劑盒五種檢測類型的優(yōu)缺點(diǎn)比較
ELISA試劑盒可分有多種檢測類型,是種廣泛應(yīng)用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。今天上午,我公司錢收到由技術(shù)部發(fā)來的ELISA技術(shù),主要內(nèi)容是“ELISA五種檢測類型的優(yōu)缺點(diǎn)比較”,下面分享給大家:
一、直接法(direct ELISA)
將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標(biāo)記的一級(jí)抗體,即可測定抗原總量,此一級(jí)抗體的特異性非常重要。
1.優(yōu)勢:操作手續(xù)簡短,因無須使用二抗可避免交互反應(yīng)。
2.缺點(diǎn):試驗(yàn)中的一抗都得用酶標(biāo)記,但不是每種抗體都適合做標(biāo)記,費(fèi)用相對(duì)提高。
二、間接法(indirect ELISA)
此測定方法與直接法類似,差別在于一級(jí)抗體沒有酶標(biāo)記,改用酶標(biāo)記的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來測定抗原量。
1.優(yōu)勢:二抗可以加強(qiáng)信號(hào),而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標(biāo)記的一級(jí)抗體則能保留它zui多的免疫反應(yīng)性。
2.缺點(diǎn):交互反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率較高。
三、雙抗體夾心法(sandwich ELISA)
被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間,其中一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體,此抗體可用酶標(biāo)記后直接測定抗原的量;或不標(biāo)記,再透過酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來測定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取,才可避免交互反應(yīng)或競爭相同的抗原結(jié)合部位。
1.優(yōu)勢:高靈敏、高專一性,抗原無須事先純化。
2.缺點(diǎn):抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。
四、競爭法(competitive ELISA)
樣本里的抗原(自由抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競爭相同的抗體,當(dāng)樣品里的自由抗原越多,就可以結(jié)合越多的抗體,而固定抗原就只能結(jié)合到較少的抗體,反之亦然。經(jīng)清洗步驟,洗去自由抗原和抗體的復(fù)合物,只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物,拿來與只有固定抗原的對(duì)照組結(jié)果相比較,根據(jù)呈色差異就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。
1.優(yōu)勢:可適用比較不純的樣本,而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
2.缺點(diǎn):整體的敏感性和專一性都較差。
五、ELISA技術(shù):基于細(xì)胞法(cell-based ELISA)
是一種新的定性蛋白檢測技術(shù),將細(xì)胞直接在微孔板里培養(yǎng),待檢測時(shí),不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞,便可直接測量微孔板里蛋白經(jīng)刺激或抑制作用后的變化。
1.優(yōu)勢:無需裂解細(xì)胞,所以目標(biāo)蛋白損失zui少,可測定完整細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。
2.缺點(diǎn):不能測定抗原量。
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