ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)具體步驟解析
ELISA試劑盒將抗原抗體反應(yīng)固相化:即試驗(yàn)中的包被環(huán)節(jié),使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機(jī)制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團(tuán)可以無(wú)選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破壞蛋白分子結(jié)構(gòu),保持其生物學(xué)特性和免疫學(xué)活性;
封閉:固相吸附蛋白是非特異性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力,為了保障抗原抗體反應(yīng)的特異性,因此,包被剩余的固相表面應(yīng)該用抗原抗體反應(yīng)無(wú)關(guān)蛋白封閉。一般認(rèn)為牛血清白蛋白是zui為理想的封閉劑,也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
抗原抗體反應(yīng):抗原或抗體在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)下可進(jìn)行特異的抗原抗體反應(yīng)。
酶反應(yīng):酶可以通過(guò)共價(jià)鍵與抗原或抗體連接形成結(jié)合物,當(dāng)抗原抗體反應(yīng)的時(shí)候,被檢測(cè)靶目標(biāo)中也結(jié)合了酶分子。
底物反應(yīng):結(jié)合在抗原抗體中的酶分子,可以促使底物發(fā)生顏色反應(yīng),檢測(cè)人員可以裸眼觀察,可以通過(guò)顏色來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在,通過(guò)顏色的深淺判斷標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的含量,也可借用酶標(biāo)儀在適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)讀取吸光度值。
ELISA試劑盒的基本原理就是將抗原抗體固定到特定的載體上進(jìn)行反應(yīng),并通過(guò)酶催化底物發(fā)生化學(xué)變化將抗原抗體反應(yīng)通過(guò)顏色的形式顯現(xiàn)出來(lái)。